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目的：
根據(jù)焦慮性抑郁疾病臨床多病因特點(diǎn)，采用慢性心理應(yīng)激聯(lián)合藥物刺激建立一種焦慮性抑郁動物復(fù)合模型；并從動物行為學(xué)、血液生化學(xué)、組織形態(tài)學(xué)以及分子生物學(xué)等多方面多層次建立該模型的評價體系；采用近靈長類動物樹鼩建立一種更接近人類臨床的新型焦慮性抑郁動物模型。
方法：
1. 66 只 SD 大鼠隨機(jī)分為正常對照組、焦慮模型組、抑郁模型組、束縛應(yīng)激 3 h 組、束縛應(yīng)激 6 h 組、慢性情緒應(yīng)激組，分別進(jìn)行造模。于實(shí)驗第 14 d、21 d、28 d 造模結(jié)束后，采用高架十字迷宮和場景恐懼測試測定大鼠的焦慮樣行為，采用曠場測試和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗測定大鼠的抑郁樣行為，Elisa 試劑盒檢測大鼠腦內(nèi)單胺遞質(zhì) 5-HT、DA 含量。
2. 120只SD 大鼠隨機(jī)分為正常對照組、溶媒對照組、焦慮模型組、抑郁模型組、束縛應(yīng)激 6 h 組、皮質(zhì)酮 40 mg/kg 組、束縛應(yīng)激 6 h+皮質(zhì)酮 20 mg/kg 組、束縛應(yīng)激 6 h+皮質(zhì)酮 30 mg/kg 組、束縛應(yīng)激 6 h+皮質(zhì)酮 40 mg/kg 組，分別進(jìn)行造模。采用高架十字迷宮測試、曠場測試、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗測定大鼠的焦慮和抑郁樣行為，Elisa 試劑盒檢測血漿 CRH、ACTH、CORT 含量，HPLC-ECD 法檢測腦內(nèi)單胺遞質(zhì)含量，HE 染色檢測 HPA軸各組織以及腦內(nèi)海馬、杏仁核、前額葉皮質(zhì)區(qū)的病理損傷情況，Western-blotting 法檢測腦內(nèi)神經(jīng)營養(yǎng)蛋白 BDNF、NGF、NT-3 的表達(dá)情況。
3. 12只中緬樹鼩隨機(jī)分為正常組、模型組、藥物組，模型組按照前期建立的焦慮性抑郁造模方法進(jìn)行造模，藥物組于造模同時給予文拉法辛（6 mg/kg）進(jìn)行干預(yù)，持續(xù)21 d。采用自主活動評分、糖水偏好實(shí)驗、Morris 水迷宮評價樹鼩的行為表現(xiàn)，Elisa 試劑盒檢測樹鼩血漿 CRH、ACTH、COR 含量，HPLC-ECD 法檢測樹鼩腦內(nèi)單胺遞質(zhì)含量，HE 染色觀察樹鼩腦內(nèi)海馬、杏仁核、下丘腦等組織的病理損傷情況。
結(jié)果：
1. 優(yōu)選出束縛應(yīng)激 6 h（21 d）作為z佳的焦慮性抑郁心理應(yīng)激模型束縛應(yīng)激 3 h 組始終未見明顯的焦慮和抑郁樣行為，腦內(nèi) 5-HT、DA 含量與對照組比較無差異；CES 組焦慮樣行為明顯，但在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗中并未表現(xiàn)出抑郁樣行為，5-HT、DA 含量相比于對照組大鼠還有上升趨勢；束縛應(yīng)激 6 h 組于造模 14 d開始表現(xiàn)出焦慮和抑郁樣行為，到 21 d 時行為表現(xiàn)趨于穩(wěn)定，同時腦內(nèi) 5-HT、DA 含量下降較為明顯，可作為z佳的焦慮性抑郁心理應(yīng)激模型。
2. 采用慢性束縛應(yīng)激 6 h 聯(lián)合皮質(zhì)酮 30 mg/kg 的方法建立焦慮性抑郁動物復(fù)合模型，并構(gòu)建該模型的多層次評價體系21 d 束縛應(yīng)激聯(lián)合皮質(zhì)酮 30 mg/kg 組大鼠進(jìn)入開臂的時間、次數(shù)、曠場中自主活動次數(shù)均較對照組及抑郁組有顯著差異，強(qiáng)迫游泳不動時間較對照組及焦慮組顯著增加，焦慮樣和抑郁樣行為均十分明顯；同時，與對照組比較，該模型組大鼠血漿 CRH、ACTH、CORT 含量顯著上升，HPA 軸亢進(jìn)；各腦區(qū)單胺遞質(zhì) 5-HT、NE、DA 的含量和神經(jīng)營養(yǎng)蛋白 BDNF、NGF、NT-3 的表達(dá)均明顯下降，單胺能系統(tǒng)失衡，神經(jīng)營養(yǎng)缺失；此外，病理切片發(fā)現(xiàn)該模型組大鼠 HPA 軸以及各腦區(qū)均存在較為明顯的損傷。
3. 采用近靈長類動物樹鼩成功建立一種新型的焦慮性抑郁動物模型模型組樹鼩自主活動評分、糖水偏食度、學(xué)習(xí)記憶能力均明顯下降，血漿 CRH、ACTH、COR含量較正常組顯著上升，腦內(nèi)單胺遞質(zhì)含量下降，病理損傷明顯；給予文拉法辛干預(yù)后，模型樹鼩的行為表現(xiàn)得到改善，血漿 CRH、COR 含量下降，各腦區(qū)5-HT、NE、DA 含量均有一定程度的回升，其中以 5-HT Z為顯著，符合該藥物提升腦內(nèi) 5-HT和 NE 濃度的臨床治療機(jī)制，該藥物預(yù)見性研究證實(shí)焦慮性抑郁樹鼩模型建立成功。
結(jié)論：
綜上，本研究通過優(yōu)選的心理應(yīng)激模型聯(lián)合皮質(zhì)酮注射，通過多濃度多時間點(diǎn)分析，終確定 21d 束縛應(yīng)激 6 h 聯(lián)合皮質(zhì)酮 30 mg/kg 能成功建立焦慮性抑郁動物復(fù)合模型；在此基礎(chǔ)上，從動物行為學(xué)、血液生化學(xué)、組織形態(tài)學(xué)以及分子生物學(xué)等多方面多層次綜合分析，建立了一套系統(tǒng)的該模型評價體系；然后進(jìn)一步以樹鼩為研究對象，建立一種更接近人類臨床的新型焦慮性抑郁動物模型。
